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胎牛血清選擇及使用常見問題解析

更新時(shí)間:2018-09-14      點(diǎn)擊次數(shù):3335

1、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?

在國內(nèi)*的血清是GIBCO和HYCLONE,度和使用范圍非常普遍,但是價(jià)格普遍偏貴。life-ilab這個品牌是李記生物的自主品牌,國外直接貼牌,在20多個品牌中選擇質(zhì)量、批間差異小的大量采購,很大程度降低批次間差異。研發(fā)小組及廣大的科研客戶使用反饋效果很好,價(jià)格實(shí)惠!對于特殊的細(xì)胞李記生物采購GIBCO或HYCLONE血源,同樣經(jīng)過檢測,用實(shí)在的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確定采購批次,而不是迷信品牌。

2、胎牛血清和小牛血清的區(qū)別及注意事項(xiàng)?

    來源不同:新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛,而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。

組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,

使用濃度不同:一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

注意事項(xiàng):某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。

3、怎樣儲存和解凍血清避免產(chǎn)品質(zhì)量受損?

    首先需要將血清產(chǎn)品從冷凍箱中取出,先放置于2~8℃冰箱使之溶解,然后放在室溫中使之全融。在融解過程中需要不定時(shí)的輕微晃動,使血清成分均勻,減少融化過程中產(chǎn)生沉淀機(jī)會。

    其次,血清長時(shí)間存放于2-8℃時(shí),可能會聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見的混濁。因此,我們推薦長期儲存血清需在-20℃以下,并避免反復(fù)凍融。

    后,若短期使用存放于4℃時(shí),請勿超過一個月。若在實(shí)驗(yàn)中血清未能一次用完一瓶血清,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)(由于血清結(jié)凍時(shí)體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形),再放回冷凍。

4、血清中包含絮狀沉淀是什么?怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過程產(chǎn)生沉淀是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。想要去除這些絮狀沉淀物,有兩種方法:1、可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。2、將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里,大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。

5、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

(1)在2~8℃解凍血清時(shí),請將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。同樣原理,分裝凍存的時(shí)候,須輕微的均勻搖晃,避免產(chǎn)生氣泡,使溫度與成分均一!

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(3)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。

(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

(5)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

6、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

    一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用完它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

7、為什么要熱滅活血清?

     事實(shí)上,大部分細(xì)胞培養(yǎng)不需要滅火血清,僅在培養(yǎng)部分特殊細(xì)胞時(shí)進(jìn)行滅火。如在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等特殊細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥梢詼缁钛a(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

8、有必要做熱滅活嗎?

在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理,不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!因?yàn)榻?jīng)過熱處理的血清,沉淀物的行程會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)有很多的“小黑點(diǎn)”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

9、血清需要做支原體檢測嗎

支原體污染是世界性問題,有報(bào)道指出,支原體輕微污染即可影響200多個基因的表達(dá),Nature雜志從2013年起,要求涉及細(xì)胞培養(yǎng)的研究,必須進(jìn)行支原體檢測。李記生物每批次血清均用支原體檢測試劑進(jìn)行檢測,可以檢出99.9%的已發(fā)現(xiàn)支原體種類,客戶不需要另外檢測,但我們?nèi)匀粡?qiáng)烈建議培養(yǎng)細(xì)胞中定期進(jìn)行支原體檢測,以排除實(shí)驗(yàn)操作中人為帶入支原體污染。

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