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sirna轉(zhuǎn)染實驗步驟（以24孔板為例）1．接種細胞對于貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80%為佳。對于懸浮細胞：轉(zhuǎn)染當天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250μLOpti-MEMI減血清培養(yǎng)基(無血清)重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。2．準備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物）(1)對于每孔細胞，取2μLsiRNA(20μM，DEP...

在生物醫(yī)學(xué)研究和細胞治療領(lǐng)域，細胞的長期保存與復(fù)蘇是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的細胞冷凍保存技術(shù)多依賴于含血清的培養(yǎng)基，但血清來源的不確定性及可能引入的污染，限制了其在某些領(lǐng)域的應(yīng)用。無血清細胞存凍液作為一種新興的細胞保存解決方案，為細胞冷凍保存技術(shù)開辟了新的篇章。本文將深入探討無血清細胞存凍液的原理、優(yōu)勢及其在細胞保存領(lǐng)域的重要性。無血清細胞存凍液是一種專為細胞冷凍保存設(shè)計的無血清、無蛋白的保存液。它通常含有細胞保護劑，如二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇等，這些成分能夠減少細胞在冷...

蛋白Marker即蛋白分子量標準，是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot實驗中，蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，此外，蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進度等作用，所以選擇合適的蛋白Marker也是實驗成功的重要條件之一。李記生物預(yù)染蛋白分子量標準預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量，以上2個圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...

無血清細胞凍存液的操作方法主要包括細胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細的操作方法：一、細胞的收集與離心細胞收集：使用常規(guī)方法收集處于對數(shù)生長期的懸浮細胞或貼壁細胞。對于貼壁細胞，可以使用胰酶或EDTA等試劑進行消化，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中。細胞離心：將收集到的細胞懸浮液置于離心管中，進行離心處理以收集細胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm，4℃，持續(xù)35分鐘。注意，離心時應(yīng)確保溫度適宜，以...

蛋白酶K，屬于一種廣譜蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)（pH4-12）保持活性，且在高溫條件下（65℃）仍能穩(wěn)定工作，這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實驗條件下發(fā)揮其作用，成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域，蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過程中，蛋白酶K能夠高效地降解細胞和組織中的蛋白質(zhì)，包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白，從而釋放出純凈的DNA，為后續(xù)的PCR擴增、測序等實驗提供高質(zhì)量的DNA模板。此...

提到蛋白提取，大家不約而同會想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對了嗎？RIPA裂解液是從動物細胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細胞膜和核膜，從而獲取細胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團和極性親水頭端基團組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所...